Исследование называется « Характеристика фенольных соединений Artemisia rutifolia spreng из пакистанской флоры и их взаимосвязь с антиоксидантными и антимикробными свойствами»
Фенолы, класс биоактивных соединений , обладают антиоксидантными и противомикробными свойствами . Научное сообщество уже давно занимается изучением органических источников фенольных соединений в оздоровительных целях.
Это обуславливает цель данного исследования, в котором использовалась нагревательная и сушильная печь Memmert – вакуумная печь VO. Исследователи изучили ценность медицинского растения, известного как Artemisia rutifolia , из Пакистана, и определили его новые природные терапевтические средства .
…был полный пробел в знаниях о фитохимических и фармакологических аспектах A. rutifolia. Поэтому в настоящем исследовании впервые была предпринята попытка изучить фенольный профиль, а также антиоксидантную и антимикробную активность различных экстрактов листьев A. rutifolia.
Материалы, методы, химикаты и реагенты:
- Галловая кислота (GA), 2,2'-дифенил-1-пикрилгидразил (DPPH)
- Аскорбиновая кислота
- Кверцетин
- Другие эталонные соединения
- Реагенты для культивирования клеток
- Карбонат натрия
- Фенольный реактив Фолина-Чокальтеу
- Хлорид железа
- Хлорид алюминия
- Картофельно-декстрозный агар
- Питательный агар
- Феррицианид калия
- Агаровый порошок
- Метанол
- Хлороформ
- Гексан
Приготовление экстракта с Memmert VO
Сначала образец A. rutifolia сушили в тени, а затем измельчали в кухонном комбайне. Результат фильтруют через сито (0,50 мм). Далее следует экстракция и фильтрация. Далее фильтраты выпаривают в вакуумной печи до постоянной массы.
После этой стадии высушенные экстракты соскребают стерилизованным шпателем, хранят во флаконах с экстрактами в холодильнике при -4°С.
Определение содержания фенолов
Общее содержание фенолов определяли методом реактива Фолина-Чокальтеу . 1 мл индивидуального раствора экстракта при соответствующем уровне разбавления смешивали с 500 мкл реактива Фолина-Чиокальтеу и 7,5 мл дважды деионизированной воды. К этому дополнительно добавляют мл 5% раствора Na2CO3 (масса/объем), полученная смесь которого инкубируется при комнатной температуре в течение 90-минутного периода.
Измеряют поглощение и общее содержание фенолов выражают в мкг эквивалентов галловой кислоты (GAE) на мг экстракта.
Общее содержание флавоноидов
Метод хлорида алюминия используется для определения общего содержания флавоноидов . Растворы экстрактов по 0,5 мл смешивают с 1,5 мл 95% этанола (об./об.), 0,1 мл 10% хлорида алюминия (м/об), 0,1 мл 1 моль л–1 ацетата калия и 2,8 мл воды. . Полученную смесь, как и ранее, инкубируют при комнатной температуре в течение 30 минут. Поглощение измеряют с помощью спектрофотометра, а общее содержание флавоноидов выражается в мкг эквивалентов кверцетина (КЭ) на мг растительного экстракта.
ВЭЖХ анализ фенольных соединений
Техника гидролиза экстрактов листьев A. rutifolia соответствует методам этого исследования с экстрактами листьев Mengkudu .
50 г экстрактов испытуемых образцов растворяют в 24 мл метанола для гомогенизации. Добавляют 16 мл дистиллированной воды и 10 мл 6М HCl. Затем следовал термостатический процесс в течение 2 часов при 95°С. Позже раствор фильтруют и затем подвергают анализу с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Проведено разделение образцов растений на градиентной ВЭЖХ. Установлена принадлежность фенольной кислоты и флавоноида, а также рассчитаны предел обнаружения (LOD) и предел количественного определения (LOQ) .
Активность по удалению свободных радикалов (анализ DPPH)
Это осуществляется в соответствии с методами, применяемыми в исследовании антиоксидантных свойств цветков и корней Pyrostegia venusta (Ker Gawl) Miers.
Раствор экстракта смешивают с равными объемами 100 мкМ раствора DPPH в метаноле, при этом полученную смесь инкубируют в течение 15 минут при комнатной температуре. Поглощение регистрируют с помощью спектрофотометра УФ-видимого диапазона при 517 нм.
Анализ восстанавливающей и антиоксидантной способности железа (FRAP)
Восстановительную способность определяли после анализа восстановительной антиоксидантной способности железа (FRAP). Подробная информация об этом, прочитав об антиоксидантной и антибактериальной активности листьев видов Etlingera (Zingiberaceae).
Поглощение реакционных смесей, измеряется с помощью УФ-видимого спектрофотометра, настроенного на 700 нм. Регистрируют общую окислительную активность, а также документируют общее содержание окислителей в мг эквивалента галловой кислоты/г растительного экстракта.
Антимикробная активность
На этом этапе, чтобы иметь возможность рассчитать антимикробную активность экстрактов листьев A. rutifolia , исследователи использовали анализ диффузии в агаровом диске . Инокуляция питательного агара и картофельной декстрозы имела место. После этого их помещали в стерилизованные чашки Петри. Экстракты разбавляли диметилсульфоксидом (ДМСО) биологической чистоты. Стерильные фильтрующие диски, пропитанные 50 мкл разбавленного раствора растительного экстракта, затем помещают в вышеупомянутые чашки Петри. Эти места инкубируют при 37°С в течение 24 часов и при 27°С в течение 48 часов. Позже антибактериальная и противогрибковая активность определяется с помощью считывателя зон.
Оценка значений минимальной ингибирующей концентрации (МИК)
Расчет минимальной ингибирующей концентрации (МИК) проводили, следуя методам, изложенным в методе микроразведения бульона . После эксперимента планшеты инкубируют при 37°С в течение 24 часов для бактерий и при 27°С в течение 48 часов для грибков. Отмечено, что причина изменения цвета индикатора резазурина варьируется в зависимости от микробного роста.
Полученные результаты
Приготовление экстракта с помощью вакуумной печи
Сначала образец A. rutifolia сушили в тени, а затем измельчали в кухонном комбайне. Результат фильтруют через сито (0,50 мм). Далее следует экстракция и фильтрация. Далее фильтраты выпаривают в вакуумной печи до постоянной массы.
После этой стадии высушенные экстракты соскребают стерилизованным шпателем, хранят во флаконах с экстрактами в холодильнике при -4°С.
Оценка значений минимальной ингибирующей концентрации (МИК)
Расчет минимальной ингибирующей концентрации (МИК) проводили, следуя методам, изложенным в методе микроразведения бульона . После эксперимента планшеты инкубируют при 37°С в течение 24 часов для бактерий и при 27°С в течение 48 часов для грибков. Отмечено, что причина изменения цвета индикатора резазурина варьируется в зависимости от микробного роста.
Полученные результаты
Вывод
Что касается цели, поставленной исследователями для этого исследования, после завершения экспериментов были зафиксированы основные результаты.
…экстракты обладают относительно мощным антиоксидантным и антимикробным потенциалом, что может объяснить их потенциал для профилактики или лечения заболеваний.
- Профилирование полифенолов привело к выявлению ценных с медицинской точки зрения фенольных кислот и флавоноидов.
- Эксперимент идет в правильном направлении , раскрывая потенциал листьев A. rutifolia в качестве ключевого источника природных антиоксидантов для пищевой и фармацевтической промышленности.
- Сравнение фенольного состава с растворителями переменной полярности может помочь в оптимизации растворителя фенольных соединений.