Для создания фрески использовался хрестоматийный библейский сюжет, до Джотто довольно часто встречавшийся в искусстве, особенно монументальном. Это момент осуществления предательства Иуды. По Библии, один из учеников Христа, его апостол, предал его за тридцать серебряных монет. Для того, чтобы стражи смогли схватить Иисуса, Иуда должен был выделить его из толпы сторонников, подойдя к нему после вечери и обняв Учителя.